植物類黃酮（Flavonoid）試劑盒說明書

                                                    微量法100管/96樣

注    意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義：

類黃酮是一類多苯化合物，屬于植物次生代謝物，對人體具有消炎，抗菌，降血脂，清除體內(nèi)羥自由基，預(yù)防癌癥等作用。

測定原理：

在堿性亞硝酸鹽溶液中，類黃酮與鋁離子形成在510nm處有特征吸收峰的紅色絡(luò)合物，測定樣品提取液在510nm處的吸光值，即可計算樣品類黃酮含量。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平、烘箱、粉碎儀、篩子、超聲破碎儀、60%乙醇、離心機(jī)、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：60%乙醇，自備。

試劑一：液體1mL×1管，4℃保存。

試劑二：液體1mL×1管，4℃保存。

試劑三：液體10mL×1瓶，4℃保存。

類黃酮提取：

將樣本烘干至恒重，粉碎，過40目篩之后，稱取約0.02g，加入2mL提取液，60℃振蕩提取2h，10000g，25℃，離心10min，取上清待測。

測定操作表：

1、   分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長至510nm，蒸餾水調(diào)零。

2、   操作表

類黃酮含量計算公式：

a.        用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 5.02x+0.0007，R² = 0.9996  

類黃酮含量（mg/g 干重）=（ΔA -0.0007）÷5.02÷(W÷V樣總)= 0.398×（ΔA -0.0007）÷W

V樣總：加入提取液體積，2.5mL； V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.108mL； W：樣品質(zhì)量，g

b.用96孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 2.51x+0.0007，R² = 0.9996

類黃酮含量（mg/g 干重）=（ΔA -0.0007）÷2.51÷(W÷V樣總)= 0.797×（ΔA -0.0007）÷W

V樣總：加入提取液體積，2mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.108mL；W：樣品質(zhì)量，g

Z低檢出限為10µg/g。