支鏈淀粉含量試劑盒說明書

                                  微量法100管/96樣

注   意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

支鏈淀粉是具有高度分支的多糖，淀粉中直鏈淀粉和支鏈淀粉的比例和含量對淀粉產(chǎn)品的加工、物化特性、糊化溫度等有著直接的影響，對于不同比例直、支鏈淀粉的淀粉的研究具有重要的意義。

測定原理：

利用80％乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開，利用雙波長比色法測定支鏈淀粉含量。

需自備的儀器和用品：

酶標儀/可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研缽、冰、yi醚和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體100mL×1瓶；4℃保存；

試劑二：yi醚100mL×1瓶；4℃保存；(自備)

試劑三：液體100mL×1瓶；4℃保存；

試劑四：液體2mL×1瓶; 4℃保存；

試劑五：液體300uL×1瓶; 4℃保存；

淀粉提取：

稱取0.01~0.02g烘干樣本（建議稱取約0.01g）于研缽中研碎，加入1mL試劑一，充分勻漿后轉(zhuǎn)移到EP管中，80℃水浴提取30min，3000g，25℃離心5min，棄上清，留沉淀，加入1mL試劑二（yi醚）振蕩5min，3000g，25℃離心5min，棄上清，留沉淀，加入1mL試劑三充分溶解，90℃水浴10min，冷卻后待測。

測定步驟：

1、   分光光度計或酶標儀預熱30min以上，蒸餾水調(diào)零。

測定管：在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20uL樣本， 14uL試劑四，120uL蒸餾水，2uL試劑五，44uL蒸餾水，混勻，分別測定550和743nm處吸光值，ΔA測定=A550-A743。

空白管：在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20uL試劑三， 14uL試劑四，120uL蒸餾水，2uL試劑五，44uL蒸餾水，混勻，分別測定550和743nm處吸光值，ΔA空白=A550-A743。

支鏈淀粉含量計算：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y=0.1214x+0.0076；x為標準品濃度（mg/mL），y為吸光值。

1、按照蛋白濃度計算

支鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(ΔA測定-ΔA空白-0.0076)×V1]÷0.1214 ÷(V1×Cpr)=8.24×(ΔA測定-ΔA空白-0.0076) ÷Cpr

2、按樣本干重計算

支鏈淀粉含量(mg/g干重)= [(ΔA測定-ΔA空白-0.0076)×V1] ÷0.1214÷(W×V1÷V2) =8.24×(ΔA測定-ΔA空白-0.0076) ÷W

V1：加入反應體系中樣本體積，0.02mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g

b. 用96孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y= 0.0607x+0.0076；x為標準品濃度（mg/mL），y為吸光值。

1、按照蛋白濃度計算

支鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(ΔA測定-ΔA空白-0.0076)×V1]÷0.0607 ÷(V1×Cpr)=16.47×(ΔA測定-ΔA空白-0.0076) ÷Cpr

2、按樣本干重計算

支鏈淀粉含量(mg/g干重)= [(ΔA測定-ΔA空白-0.0076)×V1] ÷0.0607÷(W×V1÷V2) =16.47×(ΔA測定-ΔA空白-0.0076) ÷W

V1：加入反應體系中樣本體積，0.02mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g

z低檢測限為10mg/g干重或0.1mg/mgprot。