1.抗原或抗體的包被：將需要檢測的生長因子相關抗原或抗體通過物理吸附、離子鍵合或共價結合等方式，均勻地固定在固相載體（如微孔板）表面。這是整個實驗的基礎，其質量直接影響后續(xù)步驟的效果。
2.封閉：加入無關蛋白質（如牛血清白蛋白、脫脂奶粉等）或其他封閉劑到固相載體上，以封閉未結合抗原或抗體的空白位點，減少非特異性結合，降低背景干擾。
3.標準品和樣本的準備：根據實驗需求，準備一系列不同濃度的標準品溶液，用于繪制標準曲線。同時，對待測樣本進行適當?shù)奶幚恚缦♂尅㈦x心等，以確保樣本中的待測物質能夠與固相上的抗原或抗體充分反應。
4.一抗的結合：向包被有抗原或抗體的固相載體中加入待測樣本，使樣本中的目標物與固相上的分子發(fā)生特異性結合。然后，洗去未結合的雜質，以凈化反應體系。
5.二抗的結合：加入與一抗相對應的酶標二抗，使其與一抗結合，形成抗原-抗體-酶標二抗復合物。這一步可以進一步放大檢測信號，提高檢測的靈敏度。
6.生長因子ELISA試劑盒底物的添加：加入適當?shù)牡孜锶芤海缢募谆?lián)苯胺（TMB），經辣根過氧化物酶（HRP）催化作用產生顏色變化，從而實現(xiàn)對待測物質的定量檢測。
7.終止反應：在底物反應達到適當程度后，加入終止液（如硫酸）來停止酶反應，使顏色反應穩(wěn)定下來，便于后續(xù)的測量和分析。
8.結果測定與分析：使用酶標儀等儀器測量反應產物的顏色強度或吸光度值，并根據已知的標準曲線計算出樣品中生長因子的濃度或含量。
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更新時間：2025-03-05
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